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高效液相色谱法测定牛羊杂碎等肉类中嘌呤及尿酸_王静莹

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高效液相色谱法测定牛羊杂碎等肉类中嘌呤及尿酸_王静莹内容摘要: 食品与发酵工业FOOD AND FERMENTATION INDUSTRIESDOI:10. 13995 / j. cnki. 11 - 1802 / ts. 201704037高效液相色谱法测定牛羊杂碎等肉类中嘌呤及尿酸11*112王静莹 ,薄海波 ,吉生军 ,程子毓 ,陈秀红1( 青海师范大学,青海 西宁,810000) 2( 青海省出入境检验检疫局,青海 西宁,810000)摘要建立同时测定肉类食品中尿酸、鸟嘌呤、次黄嘌呤、黄嘌呤和腺嘌呤的高效液相色谱分析方法,并测定5 μm) 色谱肉类样品中上述 4 种嘌呤及尿酸的含量。色谱条件: 资生堂 CAPCELL PAK-C18 ( 4. 6 mm × 250 mm,-3柱,柱温 30℃ ; 流动相为 7 × 10 mol / L KH2 PO4 -H3 PO4 ( pH = 3. 83) ,流速 1. 0 mL / min; 检测器为紫外检测器,检4 种嘌呤和尿酸的质测波长 254 nm; 进样量 10 μL。结果: 在上述条件下 4 种嘌呤和尿酸分离和测定效果良好,量浓度和峰面积在 0. 05 ~ 50 μg / mL 线性范围内线性关系良好,相关系数均在 0. 999 6 以上,检出限在 0. 010 ~0. 024 μg / mL 之间,精密度 检测 RSD 为 0. 25% ~ 0. 81% ,各组分回收率为 92. 0% ~ 105. 0% ,方法精密度 RSD 为6. 27% ~ 11. 09% 。结论: 该方法简便,快捷,可靠,各组分分离度好,可应用于肉类食品中嘌呤和尿酸的同时分析测定。关键词高效液相色谱( HPLC) ; 牛羊杂碎; 嘌呤; 尿酸嘌呤( C5 H4 O4 ) 是一类生物碱,是核酸的重要组成部分,人体内嘌呤的主要来源有体内合成、人体组织中核酸分解以及食物中摄取,而饮食是人体嘌呤的一个 重 要 来 源。 常 见 的 嘌 呤 主 要 有 腺 嘌 呤 ( adenine) 、鸟嘌呤( guanine) 、黄嘌呤 ( xanthine) 和次黄嘌[1]呤( hypoxanthine) 4 种,嘌呤经体内代谢最终转化生成尿酸 ( Uric acid) ,正常情况下主要经肾排出体外。尿酸是人体内特有的天然水溶性抗氧化剂 ,具有刺激树突状细胞及 T 细胞成熟以维护机体免疫力、[2]维持血压、促进伤口愈合等功能。 长期摄入高嘌呤的食品再加上一些诱导因素会导致嘌呤在体内的最终产物———尿酸的沉积,最终引发痛风。食品嘌呤含量的检测方法和样品前处理方法多种多样,目前国内外没有建立统一的标准 。嘌呤检测的方法主要有液相色谱法、纸层析法、电泳法、薄层色[3]谱法、气相色谱法和离子色谱法等,随着液相色谱法日渐普及,并因其方便、快速、灵敏、选择性高,已成为检测嘌呤的主流方法。 样品中嘌呤的提取方法有[4 - 7]酸提取法[8 - 9]、有 机 溶 剂 萃 取和超声辅助萃取本研究建立了同时测定青藏高原牛羊杂碎等风味肉制品中腺嘌呤、鸟嘌呤、次黄嘌呤、黄嘌呤及尿酸的高效液相色谱分析方法,并对 4 种嘌呤和尿酸含量进行同时测定。11. 1材料与方法材料与试剂样品:新鲜黄牛肉、牦牛肉、手抓羊肉、牛肉、牛头肉;牛腩、牛肚、牛筋、羊肝、羊心、羊肠等牛羊内脏;牛杂碎( 含有牛肚,牛筋,牛肺,牛肠,牛腩等内脏 ) 、羊杂碎( 含有羊肚,羊心,羊肺,羊肠,羊肝等内脏 ) 购自西宁市各大市场。 - 20 ℃ 冷冻保存。标准品:尿酸、鸟嘌呤、次黄嘌呤、黄嘌呤、腺嘌呤标准品( 纯度 > 98. 0% ) ,Agilent 公司。称取尿酸、鸟嘌呤、次黄嘌呤、黄嘌呤和腺嘌呤标准品各 0. 050 0 g,加 20 mL 0. 1 mol / L 的 NaOH 溶液助溶,分别用 10% 甲醇溶液定容至 100 mL 容量瓶中,摇匀,即得 500 μg / mL 的标准单一储备液。 - 20 ℃ 保存。[10 - 12]。研究者多采用 HClO、三氟乙酸和甲试剂:甲醇( 色谱纯) ,天津市光复精细化工研究[20 - 21]进行样品水解。HClO4 水解样品,分离效果所;HClO4 ( 分析纯) ,天津东方化工厂;KH2 PO4 ( 分析较好,准确度和精密度较高,检测时间短。 因此本实纯) ,北京红星化工厂;H3 PO4 ( 分析纯 ) ,天津市滨海法酸[13 - 19]4验采用高氯酸对样品进行水解。科迪化学试剂有限公司;KOH( 分析纯 ) ,四川成都化第一作 者: 硕 士 研 究 生 ( 薄 海 波 教 授 为 通 讯 作 者,E-mail:1025104004@ qq. com) 。基金项目:青藏高原特色风味食品中危害物质高通量筛查及快速检测技术研究(2014-ZJ-722)收稿日期:2016 - 08 - 23,改回日期:2016 - 10 - 162322017 Vol. 43 No. 4 ( Total 352)工厂;实验用水均为超纯水。1. 2 仪器与设备U1tiMate3000 高效 液 相 色 谱 仪 ( 配 有 紫 外 检 测器) ,美国戴安公司;FW-100 高速万能粉碎机,绍兴分析与检测市科弘仪器有限公司;雷磁 PHS-3C 型 pH 计,上海仪电科学仪器股份有限公司;L600 离心机,湘仪公司;综合考虑 4 种嘌呤和尿酸的吸收峰,选择以波长 254nm 作为实验检测波长。WB-2000 水浴锅,郑州长城科工贸有限公司;TG332A微量分析天平,湘仪天平仪器厂。2. 1. 3方法1. 3色谱条件色谱柱: 资 生 堂 CAPCELL PAK-C18 ( 4. 6 mm ×1. 3. 15 μm) ,柱温 30 ℃ ; 流动相:7 × 10 - 3 mol / L250 mm,KH2 PO4 -H3 PO4 ( pH = 3. 83) ,流速 1. 0 mL / min; 检测流动相的优化2. 1. 3. 1 流动相 pH 的选择流动相的酸度对嘌呤类物质的分离程度和保留时间影响较大,应选择合适的 pH 值使 4 种嘌呤和尿酸达-3到最佳分离效果。考察了浓度相同(7. 0 × 10 mol / L),3. 83、3. 93、4. 15) 的 KH2 PO4 - H3 PO4 溶不同 pH(3. 65,液对 4 种嘌呤及尿酸峰形和分离效果的影响。见图 1。器:紫外检测器,检测波长 254 nm;进样量 10 μL。1. 3. 2 样品的制备与前处理将样品室温下自然解冻,新鲜黄牛肉、牦牛肉、手抓羊肉、牛肉、牛头肉等肉类和牛腩、牛肚、牛筋、羊肝、羊心、羊肠等牛羊内脏;用刀切碎,再用高速万能粉碎机绞碎并匀浆,贴明标签,- 20 ℃ 冷冻保存备用。将市购的牛杂碎 ( 含有牛肚,牛筋,牛肺,牛肠,牛腩等内脏) 和羊杂碎 ( 含有羊肚,羊心,羊肺,羊肠,羊肝等内脏) 分别分样为牛杂碎肉 ( 干物质) 、牛杂碎汤、牛杂碎肉和汤 ( 混合物 ) 、羊杂碎肉 ( 干物质 ) 、羊杂碎汤、羊杂碎肉和汤( 混合物 ) ,用高速万能粉碎机绞碎并匀浆,贴明标签,- 4 ℃ 冷冻保存备用。称取 0. 200 0 g 样品于 10 mL 具塞刻度离心管中,加入 3 mL 体积分数 10% 的 HClO4 ,摇匀后在沸水浴中水解 60 min,冷却。 用 1 mol / L 的 KOH 溶液调节 pH 至 3. 8,再用超纯水定容至 10 mL,以 3 000r / min 的 转 速 离 心 30 min,上 清 液 滤 纸 过 滤,再 用0. 22 μm 微孔水膜过滤,待进样分析。2结果与分析实验条件的优化2. 1色谱柱的选择CAPCELL PAK-C18 柱采用高纯度多孔球形硅胶2. 1. 11 - 尿酸;2 - 鸟嘌呤;3 - 次黄嘌呤;4 - 黄嘌呤;5 - 腺嘌呤3. 83、3. 93、4. 15 的色谱图图 1 流动相 pH 为 3. 65、Fig. 1 Chromatogram of mobile phase pH is 3. 65、3. 83、3. 93、4. 15作为基质,表面包覆单层有机硅聚合物薄膜,并在其上键合十八烷基( C18 ) 等各种官能团的高性能填料填观察上图中 4 种嘌呤和尿酸的分离情况结果,在pH 为 3. 83 时,4 种嘌呤和尿酸可以完全分离,而且基线充的色谱柱。该填料既具有硅胶类填料的高分离能力,又具有聚合物填料的耐久性。该色谱柱适合测定稳定,重复性最好,出峰顺序依次为尿酸、鸟嘌呤、次黄黄嘌呤、腺嘌呤。因此确定流动相 pH 为 3. 83。嘌呤、极性成分,能与极性较强的水流动相兼容使分离的各组分呈现出良好的色谱峰形。实验结果表明:使用资2. 1. 3. 2生堂 CAPCELL PAK-C18 能 将 4 种 嘌 呤 和 尿 酸 完 全分离。-4pH(3. 83),5. 0 × 10 - 3 、7. 0 × 10 - 3 、不同浓度(2. 0 × 10 、1. 0 × 10 - 2 、2. 0 × 10 - 2 mol / L) 的 KH2 PO4 -H3 PO4 溶液对 42. 1. 2检测波长的选择尿酸、鸟嘌呤、次黄嘌呤、黄嘌呤和腺嘌呤都有着种嘌呤及尿酸峰形和分离效果的影响,见图 2。观察上图中 4 种嘌呤和尿酸的分离情况,流动相共轭双键,在紫外区 220 ~ 300 nm 之间有强吸收峰。的浓度对于峰形、分 离 度 影 响 较 大。 在 浓 度 7. 0 ×流动相浓度的选择采用 KH2 PO4 - H3 PO4 溶液做流动相,考察了相同2017 年第 43 卷第 4 期( 总第 352 期)233食品与发酵工业FOOD AND FERMENTATION INDUSTRIES采用外标法对进样的系列标准溶液的峰面积和相应质量浓度进行线性回归计算,得峰面积 ( Y) 与质量浓度( X) 的线性方程和相关系数。 按 3 倍信噪比计 算 检 出 限 ( LOD ) ,10 倍 信 噪 比 计 算 定 量 限( LOQ) 。数据结果见表 1。表1四种嘌呤和尿酸的回归方程和线性范围Table 1Regression equations and linear rangesof four kinds of purine and uric acid组分回归方程Y =25. 413X +7. 701尿酸鸟嘌呤 Y =83. 325X +44. 027次黄嘌呤 Y =103. 700X +54. 855黄嘌呤 Y =63. 235X +35. 920腺嘌呤 Y =121. 784X +69. 697LOD /LOQ /相关系数 线性范围//R (μg·mL - 1) (μg·mL - 1) (μg·mL - 1)0. 999 9 0. 05 ~500. 0100. 0330. 999 7 0. 05 ~500. 0140. 0450. 999 7 0. 05 ~500. 0100. 0340. 999 6 0. 05 ~500. 0130. 0450. 999 6 0. 05 ~500. 0240. 078表 1 数据结果显示:4 种嘌呤和尿酸的质量浓度和峰面积在 0. 05 ~ 50 μg / mL 线性范围内线性关系良好,相关系数 ( R) 在 0. 999 6 ~ 0. 999 9 之间,检出限在 0. 010 ~ 0. 024 μg / mL 之间。 说明此方法适合实际样品的测定。2. 3 精密度考察将 20 μg / mL 的混合标准溶液在日内连续进样 6次,根据定量的质量浓度分别计算 4 种嘌呤和尿酸的精密度。数据结果见表 2。表 2 数据结果显示: 尿酸、鸟嘌呤、次黄嘌呤、黄嘌呤和腺嘌呤的相对标准偏差为 0. 25% ~ 0. 81% ,精密度良好。表2Table 21 - 尿酸;2 - 鸟嘌呤;3 - 次黄嘌呤;4 - 黄嘌呤;5 - 腺嘌呤-45. 0 × 10 - 3 、7. 0 × 10 - 3 、图 2 流动相浓度为 2. 0 × 10 、-21. 0 × 10 、2. 0 × 10-2mol / L 的色谱图Fig. 2 Chromatogram of mobile phase concentration is 2. 0 ×10 -4 、5. 0 ×10 -3 、7. 0 ×10 -3 、1. 0 ×10 -2 、2. 0 ×10 -2 mol / L10 - 3 mol / L 的情况下,基线较稳定,分离度好。 因此-3[22]最终确定流动相浓度为 7. 0 × 10 mol / L 。2. 2线性范围及检出限、定量限分别移取 500 μg / mL 标准单一储备液,用超纯水稀释至 0. 05、10、20、30、40、50 μg / mL 的标准系列混合溶液。将系列标准混合溶液分别用 0. 22 μm组分尿酸鸟嘌呤次黄嘌呤黄嘌呤腺嘌呤2. 4118. 5721. 3120. 6121. 3021. 35精密度实验结果Result of precision experiment定量结果 / ( μg·mL - 1 )234518. 37 18. 43 18. 32 18. 3821. 19 21. 22 21. 26 21. 3320. 48 20. 47 20. 53 20. 6021. 18 21. 06 21. 21 21. 2821. 25 20. 89 21. 28 21. 32618. 3021. 2920. 5921. 2821. 32平均 RSD /%值18. 40 0. 53%21. 27 0. 25%20. 55 0. 30%21. 22 0. 43%21. 24 0. 81%回收率考察采用牛肚作为实验样品进行添加回收率实验,取已知 4 种 嘌 呤 和 尿 酸 含 量 的 牛 肚 样 品 18 份,每 份0. 200 0 g,加入 3 个不同浓度水平的四种嘌呤和尿酸的标准混合溶液,每个浓度水平平行 6 份,按照 1. 3. 2微孔滤膜过滤至进样瓶中,在 1. 3. 1 所述的色谱条节中的前处理方法进行处理后,根据添加的标准样品质量浓度和测定出的加标样品质量浓度计算 4 种嘌呤件下,各进样 10 μL,绘制标准曲线。和尿酸的回收率,尿酸、鸟嘌呤、次黄嘌呤、黄嘌呤、腺2342017 Vol. 43 No. 4 ( Total 352)分析与检测嘌呤 的 平 均 加 标 回 收 率 分 别 为 99. 1% 、99. 0% 、105. 0% 、92. 0% 、92. 6% ,根据实验测得的 18 份加标样品中 4 种嘌呤和尿酸的回收率,计算出方法精密度RSD 为 6. 27% ~ 11. 09% ,均符合分析测定的要求。2. 5 样品测定结果将牛羊杂碎等肉类样品按 1. 3. 3 节进行处理,按1. 3. 1 节的色谱条件下进样分析。采用外标法对实测样品的 4 种嘌呤和尿酸进行定性定量分析。部分样品色谱图见图 3 ~ 图 5。样品测定数据结果见表 3。1 - 尿酸;2 - 鸟嘌呤;3 - 次黄嘌呤;4 - 黄嘌呤;5 - 腺嘌呤图 4 牛肉色谱图Fig. 4 Chromatogram of beef1 - 尿酸;2 - 鸟嘌呤;3 - 次黄嘌呤;4 - 黄嘌呤;5 - 腺嘌呤1 - 尿酸;2 - 鸟嘌呤;3 - 次黄嘌呤;4 - 黄呤;5 - 腺嘌呤图 3 牛肚色谱图图 5 羊肝色谱图Fig. 3 Chromatogram of tripeFig. 5 Chromatogram of Sheep liver表3样品中 4 种嘌呤和尿酸的含量单位: mg / kgTable 3The contents of four kinds of purine and uric acid in sample尿酸2. 01鸟嘌呤124. 71次黄嘌呤684. 93黄嘌呤162. 98玉树-牦牛肉19. 20101. 95701. 12黄牛肉26. 19263. 92624. 36牛肉55. 29373. 78牛肚36. 51样品腺嘌呤207. 40总嘌呤1 180. 024 种嘌呤折算为尿酸的量1 422. 83总尿酸量1 424. 84152. 7379. 771 035. 571 247. 391 266. 59292. 44143. 571 324. 291 566. 541 592. 73458. 4580. 35241. 501 154. 081 371. 271 426. 5668. 2916. 2225. 7252. 70162. 93189. 99226. 50牛筋2. 28143. 48222. 72116. 8077. 09560. 09659. 68661. 96牛头肉1. 71249. 9329. 80212. 3527. 64519. 72583. 90585. 61牛腩13. 45108. 80368. 27142. 1428. 29647. 50768. 16781. 61牛排10. 5677. 86188. 3380. 1914. 97361. 35426. 46437. 02虎台二巷-手抓羊肉2. 48228. 86361. 59189. 2641. 23820. 94961. 64964. 12海北海晏-手抓羊肉0. 92119. 48458. 43106. 157. 33691. 39825. 55826. 47羊肝615. 711 063. 80631. 78206. 13758. 042 659. 753 134. 553 750. 26羊心0. 29410. 9175. 25377. 9329. 01893. 101 003. 811 004. 10羊肺未检出0. 05818. 0660. 54834. 9499. 161 812. 702 030. 902 030. 9059. 607. 6473. 461. 82142. 52159. 19159. 24791. 7627. 04704. 5463. 221 586. 561 771. 441 771. 44冷湖路-羊排未检出0. 0180. 94254. 1364. 258. 67407. 99485. 71485. 72五四大街-羊排12. 79259. 4790. 73210. 01102. 56662. 77760. 39773. 18羊肠0. 09191. 602. 45203. 9921. 36419. 40468. 18468. 27牛杂碎肉0. 02113. 6068. 87114. 7118. 31315. 49360. 98361. 00牛杂碎汤1. 2318. 0443. 0513. 966. 5981. 6496. 8798. 10牛杂碎肉和汤1. 7547. 2575. 0042. 9411. 03176. 22206. 37208. 12羊杂碎肉1. 95203. 3163. 24171. 968. 12446. 63504. 42506. 37羊杂碎汤9. 6517. 2229. 7113. 646. 8767. 4479. 4789. 12羊杂碎肉和汤0. 0873. 5444. 8667. 333. 71189. 44216. 24216. 32海北海晏-牦牛肉羊肚学府巷-羊排注:4 种嘌呤折算为尿酸的量是根据相对分子质量计算 4 种嘌呤转化为尿酸的理论含量值。2017 年第 43 卷第 4 期( 总第 352 期)235食品与发酵工业FOOD AND FERMENTATION INDUSTRIES表 3 结果显示:青藏高原牛羊杂碎等风味肉制品参中总尿酸含量为 89. 12 ~ 3 750. 26 mg / kg,总嘌呤含量为 67. 44 ~ 2 659. 75 mg / kg。在实测样品中羊肝的尿酸和总嘌呤含量最高,其总嘌呤含量达到 2 659. 75mg / kg,牦牛肉、黄牛肉、牛肉和学府巷-羊排中总嘌呤含量次之;牛羊杂碎汤中总嘌呤含量最低,牛羊肚次之。采用本方法在羊肺和学府巷-羊排中未检测到尿酸;在羊心、羊肚、冷湖-羊排、羊肠、牛杂碎肉和羊杂碎肉和汤中尿酸含量较低。在牛肉和牛杂碎中总嘌呤含量顺序为 :黄牛肉 >考文献[1] 王新宴,凌云,储晓刚,等 . 肉制品中四种嘌呤含量在水2008,29(7) :67 - 69.煮过程中的变化[J]. 食品科学,[2] 李迪,王军波 . 食物与人体血尿酸水平关系研究进展[J]. 中国食物与营养,2014,20(10) :86 - 89.[3] 杨海斌 . 各类肉质食物中嘌呤类物质的检测[D]. 太2012,1 - 29.原:山西医科大学,[4] 宋晶萍,朱敏 . HPLC 测定鹿胎软胶囊中 4 种嘌呤的含2014,37(1) :19 - 21.量[J]. 中药材,[5] 吕兵兵,张进杰,储银,等 . 反相高效液相色潽法检测带牛肉 > 牦牛肉 > 牛腩 > 牛筋 > 牛头肉 > 牛排 > 牛杂鱼糜中的嘌呤 含 量[J]. 中 国 食 品 学 报,2012,12 ( 7 ) :碎肉 > 牛杂碎肉和汤 > 牛肚 > 牛杂碎汤;在羊肉和羊192 - 198.杂碎中总嘌呤含量顺序为: 羊肝 > 羊肺 > 学府巷-羊排 > 羊心 > 手抓羊肉 > 五四大街-羊排 > 羊杂碎肉 >羊肠 > 冷 湖 路-羊 排 > 羊 杂 碎 肉 和 汤 > 羊 肚 > 羊杂碎。由表 3 可知,不同地方购买的牛羊杂碎等肉类中[6] 彭建春,杨靖,赵华 . 反相高效液相色潽法同时测定人血浆 5 种 嘌 呤 物 质 的 含 量[J]. 重 庆 医 科 大 学 学 报,2012,37(1) :71 - 74.[7] FAN H,YANG F Q,LI S P. Determination of purine andpyrimidine bases in natural and cultured Cordyceps usingoptimum acid hydrolysis followed by high performance liq-总嘌呤和尿酸含量差异较大,尤其是不同地的羊排中uid chromatography[J]. Journal of Pharmaceutical and Bio-总嘌呤和尿酸含量有着显著的差异 ,羊排中总嘌呤含medical Analysis,2007,45(1) :141 - 144.量学府巷-羊排 > 五四大街-羊排 > 冷湖路-羊排,三个地区结果差异较大。 嘌呤含量差异大可能是由于生物体生长环境和自身生长情况不一样 ,造成同一部位的肉中嘌呤含量差异较大。在痛风发病率高的青藏高原地区 ,为预防和治疗痛风症,建议人们少量食用高嘌呤含量的黄牛肉、牦牛肉、牛肉、羊肺、羊排,尤其是嘌呤含量特高的羊肝;可合理食 用 牛 羊 肚 和 牛 羊 杂 碎 等 嘌 呤 含 量 较 低 的食物。[8] 王萍,漆淑华,黄丽思,等 . 南海中华小尖柳珊瑚中嘌呤和嘧啶类化合 物 的 研 究[J]. 天 然 产 物 研 究 与 开 发,2012,24(1) :4 - 7.[9] CLARIANA M,GRATACOS-CUBARS M,HORTOS M,etal. Analysis of seven purines and pyrimidines in pork meatproducts by ultrahigh performance liquid chromatographytandem mass spectrometry[J]. Journal of ChromatographyA,2010,1217(26) :4 294 - 4 299.[10] 王艳,杨培民,代龙,等 . HPLC 测定水蛭仿生酶解有效部位中次黄嘌呤及尿苷[J]. 中国实验 方 剂 学 杂 志,2011,17(13) :74 - 76.3结论本研究建立的方法对尿酸、鸟嘌呤、次黄嘌呤、黄[11] 宋艳,王智鼎,李岳飞,等 . 兔心肌中次黄嘌呤纯化工艺的优化[J]. 中国生化 药 物 杂 志,2012,33 ( 6 ) :836- 841.嘌呤和腺嘌呤分离效果好,能快速、准确的检测定量[12] 程庆红,张颖,孟凡艳,等 . 高效液相色谱法测定虾仁肉类食品中 4 种嘌呤和尿酸的含量。 此方法在线性和牡蛎中嘌呤类物质[J]. 应用化工,2013,42 (10) :范围 0. 05 ~ 50 μg / mL 内 线 性 关 系 良 好,相 关 系 数1923 - 1926.( R) 在 0. 999 6 ~ 0. 999 9 之间,方法检出限在 0. 010~ 0. 024 μg / mL 之 间,精 密 度 RSD 为 0. 25% ~[13] 谢芳钦,陈爱平,罗朝晨,等 . 常见饮品中嘌呤含量的2013,14(7) :551 - 552.测定[J]. 中国预防医学杂志,0. 81% ,各组分回收率在 92. 0% ~ 105. 0% 之间,方[14] KANEKO K,YAMANOBE T,FUJINMORI S. Determi-法精密度 RSD 为 6. 27% ~ 11. 09% ,适用于 4 种嘌呤nation of purine contents of alcoholic beverages using high和尿酸的同时分析测定。 应用此方法测定的青藏高performance liquid chromatography[J]. Biomedical Chromatography,2009,23(8) : 858 - 864.原牛羊杂碎等特色肉类食品中嘌呤和尿酸的含量数[15] 崔素萍,车康,谢微,等 . 高效液相色谱测定脱脂豆粕据,可为通风发病率高的青藏高原地区消费者提供科中嘌 呤 含 量[J]. 中 国 食 品 学 报,2014,14 ( 7 ) : 224学健康的饮食指导。- 229.2362017 Vol. 43 No. 4 ( Total 352)分析与检测[16] 施政,刘健,申屠建中,等 . 高效液相色谱法定量尿酸、黄嘌呤和次黄嘌呤在人体血清中的浓度[J]. 中国临2013,18(5) :532 - 536.床药理学与治疗学,[17] 鲁洋,钱和,张伟国,等 . 纳豆芽孢杆菌发酵液中嘌呤2014,35(2) :59 - 62.碱基的检测[J]. 食品工业科技,cleotides and Nucleic Acids,2010,29 ( 4 - 6 ) : 518- 521.[20] 凌云,王新宴,雍炜,等 . 高效液相色谱法检测肉类食品中四 种 嘌 呤 碱[J]. 分 析 化 学,2008,36 ( 6 ) : 724- 728.[18] INAZAWA K,SATO A,KATO Y,et al. Determination[21] 曲欣,林洪,隋建新 . 高效液相色谱法测定食品中嘌呤and profiling of purines in foods by using HPLC and LC-2014,44含量[J]. 中国海洋大学学报( 自然科学版) ,MS[J]. Nucleosides,Nucleotides and Nucleic Acids,2014,33(4 - 6) : 439 - 444.(12) :41 - 47.[22] 杨海斌,张加玲,刘桂英,等 . 高效液相色谱法同时测[19] YAMAOKA N,KANEKO K,KUDO Y,et al. Analysisof purine in purine-rich cauliflower[J]. Nucleosides,Nu-定肉类食品中的嘌呤和尿酸[J]. 卫生研究,2012,41(2) :303 - 306.Determination of purine and uric acid in cooked cow andsheep offal by high performance liquidWANG Jing-ying1 ,BO Hai-bo1* ,JI Sheng-jun1 ,CHENG Zi-yu1 ,CHEN Xiu-hong21( Department of Chemistry,Qinghai Normal University,Xining 810008,China)2( Qinghai Entry-Exit Inspection and Quarantine Bureau,Xining 810008,China)ABSTRACTA high performance liquid Chromatography method for the determination of uric acid,guanine,hypo-xanthine,xanthine and adenine in meat was established and applied. The detecting method for Chromatography was:Shiseido CAPCELL PAK-C18 (4. 6 mm × 250 mm,5 μm) column,column temperature was at 30 ℃ . The mobile phasewas 7 × 10 - 3 mol / L KH2 PO4 -H3 PO4 ( pH = 3. 83) at a flow rate of 1. 0 mL / min. The UV detector was used and thewavelength was set at 254 nm and the Sample volume was 10 μL. Result: Under the above conditions,good separation was obtained and four kinds of purines and uric acid was showed in the range of 0. 05 - 50 μg / mL; a good linearrelation was observed between the concentration and peak area,and all the correlation coefficients are higher than 0.9996,the limit of detection was between 0. 010 - 0. 024 g / mL,precision detection of RSD% was between 0. 25% -0. 81% ,the recovery rate of each component was between 92. 0% - 105. 0% ,the precision RSD% was between6.27% - 11. 09% . Conclusion: The method was simple,rapid and reliable,had a good separation for each component,and can be used for the analysis and determination of purine and uric acid in meat products.Key wordsHPLC; cooked chopped entrails of cattle and sheep; purine; uric acid2017 年第 43 卷第 4 期( 总第 352 期)237

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